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反相Flash柱层析可以干法上样吗？
反相Flash柱层析可以干法上样吗?柱层析是有机合成中常用的分离纯化手段，大公司合成实验室一般都配备自动化程度比较高的分离纯化工具—快速制备色谱仪(中低压制备色谱)，在医药外包公司俗称过柱机。由名字可知，这就是个替代手工过柱的工具，他所用到的柱子我们常叫它Flash柱。除了可以用来过硅胶正相柱，还可以过乙腈(甲醇)/水体系的C18填料的反相柱，反相柱一定程度上可以替代制备液相色谱，特别是大量样品分离时，可以节省大量成本。
往期文章: 【柱层析技术】中已经详细介绍了湿法上样和干法上样，文章中主要是介绍了硅胶柱柱层析技术，因此用过柱机过正相硅胶柱时情况类似。对于乙腈(甲醇)/水体系的C18填料的反相柱，湿法上样是应用广泛，使用简单的上样技术。如果是固体样品，只需将样品直接溶解在尽量少的溶剂中，然后注入色谱柱中即可完成上样，而如果是液体样品，其上样方式则会更简单，直接将样品注入色谱柱即可。但是湿法上样有一些缺点：1、当上样体积增大时，样品在色谱柱当中所占用的体积会增大，扩散效应也会明显增强，导致色带变宽，降低分离效率，纯度也随之降低;2、请尽量使用大极性的溶剂溶解样品，如果极性过小，样品还没有来得及和固定相相互作用，就已经被极性溶剂洗脱下色谱柱，导致保留时间不够，洗脱不充分，分离效率大大降低。特别是极性特别大的样品，湿法上样后很容易直接把样品冲出，没有分离效果。C18反相柱能否像正相硅胶柱一样，拌样后，进行干法上样呢?小编亲试，完全可以进行干法上样，缺点就是C18填料有点贵，但是拌样后的C18填料可以冲洗干净后可以重复利用。与硅胶柱的拌样类似，先用沸点较低溶剂溶解样品，加入C18硅胶后，旋干，然后将干粉转移到空柱子中，填料上方加上筛板或脱脂棉都可以，旋紧，将上样柱接在反相柱上直接过柱就可以了(建议先将反相柱平衡好，接上上样柱后直接运行梯度)。
反相柱干法上样相比湿法有以下优点：一、干法上样峰型变窄，分离效果明显提高。二、另外对于一些溶解度较差的样品，如果利用湿法上样，需要用大量的溶剂溶解，因此上样量受到限制，如果一次上太多，分离效果很差，但干法上样克服了此缺点。三、还有一些样品湿法上样注入反相柱后，直接从水相比例较高的梯度开始冲柱时，产品会迅速析出，导致柱子堵住，干法上样则很少堵柱。四、对于大极性的化合物(LCMS保留时间在0.5min以内的化合物)，湿法上样，有时直接用水相就可以将化合物冲出，用干法上样则可以明显提高柱效以及分离样品纯度。
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